雙波長分光光度法的基本原理及應(yīng)用

應(yīng)用分光光度法對共存組分進(jìn)行不分離定量測定時，通常采用的方法有雙波長法，三波長法，導(dǎo)數(shù)光譜法、差譜分析法及多組分分析法等方法，其快速，簡便的優(yōu)點(diǎn)使這些方法在實(shí)用分析中得到越來越廣泛的應(yīng)用。其中以雙波長法的應(yīng)用為zui多，該法的準(zhǔn)確度和精密度要高于其它方法，是對共存組分不分離定量測定的有效方法之一。

實(shí)用中的雙波長法主要采用等吸收波長法和系數(shù)倍增法兩種分析方法，下面就其基本原理和應(yīng)用作以介紹：

一、等吸收波長法

1、基本原理

圖1是同一組分三個不同濃度供試液的吸收光譜圖，經(jīng)典分光光度法的定量測定通常是在被測組分的zui大吸收波長處進(jìn)行測定，根據(jù)蘭伯一比耳定律，其吸光度值與被測組分的濃度C成正比，即：

依（3）式測定被測組分a，則可*消除b組分的干擾，達(dá)到共存組分不分離進(jìn)行定量測定的目的。

2、影響因素

（1）測定波長和組合波長的選擇應(yīng)使被測組分的△A值盡可能大，以增加測定的靈敏度和度。

（2）測定波長和組合波長應(yīng)盡可能選擇在光譜曲線斜率變化較小的波長處，以減小波長變化對測定結(jié)果的影響。

（3）干擾組分等吸收波長（組合波長）的選擇必須，只有其△A值等于零時才能*消除干擾，否則會引入測定誤差。為此，在實(shí)用分析中，都是先配制一個干擾組分b的供試液，在儀器上準(zhǔn)確找出等吸收波長 ，然后再對樣品進(jìn)行測定。

3 應(yīng)用實(shí)例

等吸收波長法的一個典型應(yīng)用實(shí)例為收載于《中華人民共和國藥典》中的抗菌消炎藥復(fù)方磺胺甲噁唑片的含量測定。復(fù)方磺胺甲噁唑片中含有磺胺甲噁唑（SMZ）和甲氧芐（TMP）兩個成分，其吸收光譜見圖3。

當(dāng)測定SMZ時，選擇其zui大吸收波長257nm為測定波長，可以在干擾組分TMP的光譜曲線上304nm附近找到等吸收波長為組合波長消除其干擾；當(dāng)測定TMP時，選擇239nm為測定波長，可以在干擾組分SMZ的光譜曲線上295nm附近找到等吸收波長為組合波長消除其干擾，分別對SMZ和TMP進(jìn)行含量測定。

二、系數(shù)倍增法

1 基本原理

當(dāng)測定被測組分時，并非都能在干擾組分的光譜曲線上找到等吸收波長（見圖4），這時，如果能在干擾組分b的光譜曲線上找到對應(yīng)于被測組分a光譜曲線無吸收的組合波長

λ2，即可采用系數(shù)倍增法進(jìn)行測定。

設(shè)被測組分的測定波長為λ1，在此波長處被測組分a和干擾組分b均有吸收，在組合波長λ2處，被測組分a無吸收而干擾組分b有吸收，用干擾組分b的對照品在λ1和λ2波長處測定吸光度，其比值為一常數(shù)K，可按下式計算，求得被測組分的吸光度值，再計算其含量。

2 影響因素

（1）測定波長與組合波長應(yīng)盡可能選擇在光譜曲線斜變化較小的波長處，以減小波長變化對測定結(jié)果的影響。

（2）組合波長λ2必須選擇在被測組分無吸收干擾組分有吸收的波長處，這時共存組分在組合波長λ2處測得的吸光度值為干擾組分的凈吸光度值。

（3）先用干擾組分的對照品，在測定波長λ1和組合波長λ2處準(zhǔn)確測定吸光度值，求得常數(shù)K，然后才能計算出共存組分中干擾組發(fā)b在λ1波長處的吸光度值A(chǔ)bλ2。

3 應(yīng)用實(shí)例

系數(shù)倍增法一個典型應(yīng)用實(shí)例為收載于日本藥局方中的解熱鎮(zhèn)痛藥阿斯匹林鋁的含量測定，阿斯匹林鋁中因含有分解產(chǎn)物游離子楊酸而干擾其測定。

圖5中的a為純阿斯匹林鋁的光譜曲線，b為水楊酸對照品的光譜曲線，c為含游離子楊酸的阿斯匹林鋁光譜曲線，在阿斯匹林鋁的測定波長278nm處水楊酸有干擾，而在水楊酸的zui大吸收波長308nm處，阿斯匹林鋁已無吸收。當(dāng)用水楊酸對照品測得AS’和AS的比值K后，即可用系數(shù)倍增法對含有游離水楊酸的阿斯匹林鋁進(jìn)行含量測定。

三、結(jié)語

雙波長分光光度法在對共存組分不分離定量測定時操作簡便，測定結(jié)果準(zhǔn)確，在普通分光光度計上均可進(jìn)行測定。目前，雙波長分光光度法已在新一代電子計算機(jī)控制的分光光度計如普析通用公司TU－1800PC，TU－1901等儀器上被設(shè)計為一種的測定如計算程序，使得采用這一分析方法進(jìn)行的測定和計算均可自動進(jìn)行，因此，雙波長分光光度法解決共存組分不分離定量測定中必將得到廣泛的應(yīng)用。